Süt ve beyaz peynirde Cryptosporidium parvum canlılığının propidium monoazide RT-PCR ile araştırılması
Zorunlu intraselüler bir parazit olan Cryptosporidium parvum'un ookistleri, oral yolla alındığında enfeksiyona sebep olur. Zootonik bir parazit olup insanlara bulaşmasında evcil hayvanların, özellikle buzağı dışkısının rolü büyüktür. Etrafa saçılan ookistler çiğ süte bulaşabilmekte ve bu durum süt çiftliklerinde sıkça görülmektedir. Tarafımızdan planlanan bu çalışmada kontamine olmuş çiğ sütten yapılan Beyaz peynirde ve pastörize edilen sütteki ookistlerin canlılığı araştırılacaktır. C. parvum ookistlerinin canlılığı birçok farklı yöntem ile yapılmaktadır. Moleküler yöntemlerin gelişmesiyle birlikte son zamanlarda propidium monoazid-PCR (PMA-PCR) yöntemi ile ookist canlılık testi yapılmaktadır. PMA kimyasalı ölü hücrelerin (bu çalışma için Cryptosporidium oositlerinin) zarlarından geçerek DNA'ya bağlanır. UV ışığı ile aktifleşerek DNA'yı parçalar. Böylelikle hedeflenen gen bölgesi PCR ile amplifiye edilemez. Canlı hücrelerde ise PMA hücre zarını geçemediğinden DNA'ya zarar veremez. Bu bağlamda PCR sonucunda amplikon elde edilmesi hücrenin canlılığını gösterir. Tarafımızdan planlanan bu çalışmada PMA ile muamele edilen örneklerden DNA ekstraksiyonu yapılacaktır. Real Time PCR ile her örneğin Ct değeri hesaplanacak ve ookist canlılık oranları hesaplanacaktır.
Tamamlandı
21.08.2020
20.08.2022
49265
TÜRK LİRASI
Yükseköğretim Kurumları tarafından destekli bilimsel araştırma projesi